1. Giới thiệu chung về test ELISA của Morinaga
Hướng dẫn sử dụng test ELISA của Morinaga là nội dung quan trọng đối với các đơn vị kiểm nghiệm thực phẩm, nhà máy sản xuất và phòng thí nghiệm kiểm tra dị ứng thực phẩm. Đây là bộ công cụ hiệu quả giúp phát hiện nhanh và chính xác các protein gây dị ứng, kể cả ở nồng độ cực thấp.
Morinaga BioScience, Inc. là nhà sản xuất danh tiếng của Nhật Bản, chuyên cung cấp các Food Allergen ELISA KitⅡ – dòng sản phẩm kiểm tra protein gây dị ứng trong thực phẩm như trứng (Egg), lúa mì/gluten (Wheat/Gluten), đậu nành (Soya), hạnh nhân (Almond) và nhiều loại khác. Các bộ kit này được thiết kế để phòng thí nghiệm và kiểm soát chất lượng thực phẩm.
Phương pháp ELISA là một kỹ thuật miễn dịch học dạng sandwich, giúp kiểm tra và định lượng protein dị ứng với độ đặc hiệu và độ nhạy cao, phù hợp cho ngành công nghiệp thực phẩm và phòng xét nghiệm. Đặc biệt, hướng dẫn sử dụng test ELISA của Morinaga giúp người dùng giảm thiểu sai số, tăng độ chính xác và tiết kiệm thời gian thao tác.
Nguyên lý hoạt động của test ELISA:
Morinaga sử dụng phương pháp Sandwich ELISA: mẫu được chiết xuất, sau đó kháng nguyên (ví dụ protein dị ứng) sẽ được bắt giữ bởi kháng thể cố định trong giếng. Sau các bước rửa, kháng thể thứ hai liên kết enzyme được thêm vào và tạo phản ứng màu khi có thêm cơ chất, và kết quả được đo bằng máy đọc tại bước sóng 450 nm.
2. Chuẩn bị trước khi sử dụng test ELISA của Morinaga
2.1. Lưu ý bảo quản và chuẩn bị kit
Để quá trình xét nghiệm đạt hiệu quả cao, việc tuân thủ đúng hướng dẫn sử dụng test ELISA của Morinaga là điều cần thiết. Test kit nên được bảo quản ở nhiệt độ 2–8 °C để giữ ổn định phản ứng và hiệu quả. Mỗi kit thường chứa: microplate đã phủ kháng thể, dung dịch đệm mẫu, dung dịch rửa, kháng thể liên kết enzyme, cơ chất (TMB), dung dịch dừng (stop solution), và chất chuẩn (standard).
2.2. Các dụng cụ và hóa chất cần thiết
Bạn cần chuẩn bị thêm: nước cất hoặc khử ion, micropipette (20–1000 µL) và đầu tip, ống ly tâm, máy ly tâm, máy đọc hấp thụ quang tại bước sóng 450 nm (với tham chiếu 600–650 nm), thiết bị ủ (nhiệt độ phòng/ nước nóng), máy rung hoặc lắc ngang, và giấy kiểm tra pH nếu cần.
3. Cách sử dụng test ELISA của Morinaga – từng bước rõ ràng
Hướng dẫn sử dụng test ELISA của Morinaga bao gồm 9 bước chính như sau:
3.1. Bước 1 – Chuẩn bị mẫu (nghiền, cân, chiết, ly tâm)
- Nghiền mẫu để đồng nhất.
- Cân 1 g mẫu, thêm 19 mL dung dịch chiết mẫu.
- Chiết mẫu bằng cách đun sôi trong 10 phút hoặc lắc qua đêm nếu không đun nóng
3.2. Bước 2 – Pha dung dịch chiết và pha loãng mẫu
- Pha Sample Extraction Solution theo hướng dẫn (ví dụ từ dung dịch đệm, kháng thể, mercaptoethanol, nước)
- Sau chiết, điều chỉnh pH về khoảng 6.0–8.0, ly tâm, thu dịch, và pha loãng 20‑lần (Dilution I)
3.3. Bước 3 – Thêm mẫu vào giếng và ủ kháng thể chính
Pipet 100 µL tiêu chuẩn chuẩn và mẫu đã pha vào từng giếng trên microplate.
3.4. Bước 4 – Rửa giếng sau khi ủ
Rửa microplate 6 lần với Wash Buffer đã pha loãng
3.5. Bước 5 – Thêm kháng thể liên kết enzyme và ủ
- Thêm 100 µL Enzyme‑conjugated Antibody vào từng giếng.
- Ủ tiếp 30 phút ở 20–25 °C
3.6. Bước 6 – Rửa giếng lần hai
Rửa 6 lần để loại bỏ kháng thể thừa
3.7. Bước 7 – Thêm cơ chất enzyme và phát màu trong tối
Thêm 100 µL dung dịch cơ chất (TMB), ủ 20–30 phút trong bóng tối để tạo tín hiệu màu xanh
3.8. Bước 8 – Dừng phản ứng
Thêm 100 µL Stop Solution (thường là acid sulfuric 1 N) cho mỗi giếng để ngừng phản ứng màu
3.9. Bước 9 – Đọc kết quả bằng máy đọc hấp thụ (OD 450 nm)
- Đọc OD tại 450 nm, có thể trừ tín hiệu tham chiếu từ 600–650 nm.
- Tính nồng độ protein dựa trên đường cong chuẩn (standard curve). Nếu giá trị vượt quá, cần điều chỉnh pha loãng mẫu
4. Mẹo đảm bảo kết quả chính xác khi sử dụng test ELISA của Morinaga
Để đảm bảo hiệu quả của việc áp dụng hướng dẫn sử dụng test ELISA của Morinaga, bạn nên chú ý:
- Phối hợp trong cùng một lô kit để tránh sai số do lô khác nhau
- Mang thuốc thử về nhiệt độ phòng trước khi dùng để kháng thể và dung dịch hoà tan đồng đều
- Thực hiện giếng lặp (duplicates/triplicates) để phát hiện điểm bất thường và cải thiện độ tin cậy
- Không cho thuốc thử trở lại chai ban đầu, dùng đầu tip mới để tránh nhiễm chéo
- Xây dựng đường chuẩn mới mỗi lần chạy, tuân theo độ pha loãng khuyến nghị
- Tối ưu pha loãng mẫu sao cho nằm trong vùng tuyến tính giữa các điểm chuẩn (ví dụ giữa điểm chuẩn số 2 và 4)
- Đặt các giếng điều khiển nền và kiểm soát để theo dõi nhiễm bẩn hoặc lỗi kỹ thuật
- Tuân thủ nghiêm thời gian, nhiệt độ, thao tác ủ và lắc, vì là các yếu tố ảnh hưởng lớn đến kết quả
- Đọc kết quả ngay khi dừng phản ứng và sử dụng phần mềm xử lý phù hợp
Bằng cách làm theo hướng dẫn sử dụng test ELISA của Morinaga một cách chính xác và đầy đủ — từ khâu chuẩn bị mẫu, phản ứng ELISA, đến đọc kết quả và kiểm soát kỹ thuật — bạn sẽ thu được kết quả định lượng protein dị ứng (như trứng, sữa, lúa mì, vừng v.v.) chính xác và tin cậy cho mục đích kiểm nghiệm thực phẩm. Những cách sử dụng test dị ứng ELISA này đã được chứng minh hiệu quả khi áp dụng đúng, đặc biệt với tính nhạy cao và khả năng áp dụng trên các mẫu thực phẩm đã qua chế biến.
